烟曲霉菌壳聚糖酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 CNKI文献
根据GenBank中发布的烟曲霉菌壳聚糖酶(Aspergillusfumigatuschitosanase,EC3.2.1.132)基因序列人工合成8条DNA长链及4条引物链。DNA链的设计上在不改变壳聚糖酶氨基酸组成的前提下选择大肠杆菌使用频率高的密码子。P...
胰岛素样生长因子1对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响 CNKI文献
目的 研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成骨细胞中BMP-2、BMP-7基因表达的影响,探讨IGF-1促进成骨细胞增殖、分化的分子机理。方法 以不同浓度的IGF-1刺激分离培养的大鼠成骨细胞,提取细胞总RNA,RT-PCR扩增BMP-2及BMP-...
梁东春 王宝利... 《中国骨质疏松杂志》 2004年01期 期刊
关键词： 胰岛素样生长因子1 / 成骨细胞 / BMP-2、BMP-7
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目的:建立人胰岛素样生长因子1(IGF-1)基因大肠杆菌高效表达系统及rhIGF-1的初步纯化方法。方法:将人IGF-1基因克隆入原核表达质粒载体pBV220,重组质粒转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达,WesternBlot对表达产物进行鉴定...
目的 :克隆含信号肽编码序列的胰岛素样生长因子1(IGF -1)基因 ,为转IGF -1基因研究奠定基础。方法 :分别扩增IGF -1信号肽及成熟肽的编码序列 ,以PCR的方法对二者进行拼接 ,将拼接后的DNA片段克隆入质粒载体pGEM -Te...
人骨形态发生蛋白2(BMP-2)在巴斯德毕赤酵母中的表达 CNKI文献
以重组质粒pUC-BMP2为模板PCR扩增人BMP-2成熟肽编码序列,将该序列克隆入pGEM-T载体进行DNA序列分析后亚克隆入分泌型毕赤酵母表达载体pPIC9K中。重组质粒oPIC9K-BMP2经BelⅡ酶切后回收线性化片段,聚乙二醇法转染毕赤...
梁东春 左爱军... 《中国生物工程杂志》 2005年07期 期刊
关键词： 人骨形态发生蛋白2(BMP-2) / 毕赤酵母 / 分泌表达
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壳聚糖与重组人骨形成蛋白2复合物体外成骨作用的研究 CNKI文献
目的探讨复合重组人骨形成蛋白2(recombinanthumanbonemorphogeneticprotein2,rhBMP-2)的壳聚糖-明胶支架的体外成骨作用。方法将rhBMP-2与壳聚糖-明胶支架复合,按2×104/ml的密度接种成骨细胞系或成肌细胞系至rh...
以大鼠染色体DNA为模板 ,PCR分别扩增胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF Ⅰ )基因外显子 2编码区和外显子 3编码区 ,并使外显子 2编码区的 3′端与外显子 3编码区的 5′端有相同的 4 0个碱基。采用外显子拼接法 ,以两种扩增产物...
关键词： 外显子拼接 / 大鼠胰岛素样生长因子Ⅰ / 基因克隆 / 表达
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大肠杆菌偏嗜性人胰岛素样生长因子1基因的克隆及表达 CNKI文献
目的:提高以大肠杆菌为工程菌制备重组人胰岛素样生长因子1(rhIGF-1)的产率。方法:依据大肠杆菌遗传密码子使用频率表,人工合成3条DNA单链,PCR拼接扩增出适于在大肠杆菌中表达的人IGF-1基因。将此基因克隆入pGEM-T载体...
随着对疾病认识的不断深入 ,人们发现许多疾病在病因上都有着其独特的遗传背景 ,对这些遗传信息的掌握无疑会对疾病的诊断和防治大有裨益 ,其中获得某个个体的基因组ＤＮＡ是进行基础研究及临床检测的先决条件。本室曾...
胰岛素样生长因子1(IGF-1)mRNA同源模板竞争性PCR定量方法的... CNKI文献
胰岛素样生长因子 1(IGF 1)是一种多功能的细胞增殖调控因子 ,其表达水平受多种因素的影响 ,为了研究IGF 1基因在转录水平上的调控机制 ,建立了定量测定IGF 1mRNA的竞争性PCR方法 .同时 ,也建立了一种简便的制备同源性...
骨组织工程材料生长因子复合物与成骨细胞相容性研究 CNKI文献
目的 :研究复合有生长因子的骨组织工程材料与成骨细胞的相容性 ,以及所复合的生长因子对成骨细胞增殖、分化的作用。方法:自新生大鼠颅盖骨分离培养成骨细胞接种于复合有BMP_2、IGF_1等生长因子的骨组织工程材料上。...
目的 建立一种对胰岛素样生长因子 I( IGF- 1)基因 m RNA进行定量检测的竞争 PCR方法 ,对碘缺乏状态下 IGF- 1基因的表达水平进行检测。方法 以自行建立的竞争性 PCR方法对低碘及正常大鼠肝脏中IGF- 1基因 m RNA的水...
目的:研究转胰岛素样生长因子1(IGF-1)基因对细胞增殖的影响。方法:构建含IGF-1信号肽及成熟肽全部编码序列的重组报告基因载体pTracer-IGF-1,脂质体法将该重组质粒转染入体外培养的C2C12小鼠成肌细胞。以杀稻瘟毒素(...
不同碘营养大鼠血清胰岛素样生长因子I水平的研究 CNKI文献
目的 研究不同碘营养状态下大鼠血清中胰岛素样生长因子 I(IGF1)的浓度及其与甲状腺素水平的相关性。方法 复制碘缺乏大鼠动物模型 ,给予不同的碘营养。分离大鼠血清 ,以自行建立的双位点夹心EL ISA检测 IGF1浓度 ,...
为进一步筛选、克隆和表达牦牛相关基因构建了牦牛肝脏的cDNA文库,从牦牛肝脏中提取、分离mRNA,逆转录合成cDNA后,以pSPORT1质粒为载体构建cDNA文库。经鉴定,牦牛肝脏cDNA文库的库容量为1×10~6转化子/μg cDNA,以...
用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA制备方法的比较 CNKI文献
目的 :比较4种用于PCR实验的毕赤酵母基因组DNA的制备方法 ,以寻求一种稳定、简便的DNA模板制备方法 ,用于毕赤酵母重组子的分析。方法 :分别用玻璃珠法、煮沸法、煮 -冻 -煮法以及直接法制备毕赤酵母基因组DNA模板 ,...
目的 :对4种PAGE方法进行比较 ,选择出适用于分离小分子质量多肽的电泳方法。方法 :用常规SDS_PAGE、低分子质量Tricine_SDS_PAGE、多肽SDS_PAGE以及含尿素的多肽SDS -PAGE4种方法对相同的样品进行电泳分离 ,并对分离...
目的建立一种在提取总RNA的同时又能制备基因组DNA的方法。方法利用TR IZOL法收集水相沉淀总RNA后余下的中间层和有机相,合并去除蛋白质,再提取基因组DNA。通过紫外分光光度法和电泳法予以鉴定,并以之为模板进行PCR扩...
目的 :对目前广泛使用的磷酸钙转染法、脂质体转染法以及新兴的壳聚糖转染法这三种非病毒转染载体进行比较。方法 :以成肌细胞系C2C12为宿主细胞 ,含氯霉素乙酰转移酶 (CAT)报告基因的质粒pcDNA3.1 +CAT为靶DNA ,采用...
人类Survivin基因的cDNA克隆及序列分析 CNKI文献
目的 :克隆Survivin基因的cDNA ,为分子信标定量检测其mRNA提供模板标准物。方法 :以国人胎脾为材料提取总RNA作为模板 ,采用逆转录_聚合酶链式反应 (RT_PCR)方法扩增并克隆SurvivincDNA ,并将其重组到 pUC18质粒中 ,...
关键词： Survivin基因 / 克隆 / 分子 / 逆转录聚合酶链反
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